🧬 专题:蛋白质纯化
蛋白质纯化是生物化学研究中的核心步骤,旨在从复杂混合物中分离出目标蛋白质,确保其活性与功能完整性。以下是关键要点:
1. 常用纯化技术
- 层析法:利用分子大小、电荷或亲和力差异(如柱层析、亲和层析)分离蛋白质
- 电泳:通过电场驱动迁移(如SDS-PAGE、等电聚焦)
- 超滤与透析:基于分子量筛选杂质
- 沉淀法:使用盐析(如硫酸铵)或有机溶剂沉淀目标蛋白
2. 纯化流程关键点
- 初步分离:细胞裂解 → 沉淀/离心
- 精细纯化:层析柱操作 → 洗脱目标蛋白
- 验证纯度:Western_Blot或质谱分析
3. 应用领域
- 药物开发:生产单克隆抗体等治疗性蛋白
- 学术研究:酶活性分析、结构生物学
- 工业生产:重组蛋白规模化制备
4. 注意事项
- 保持低温防止蛋白变性
- 选择合适的缓冲液(如Tris-HCl)
- 避免过度离心导致活性损失
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